Estandarización de protocolos de extracción de ADN para el laboratorio de biología molecular de la Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE – Extensión Santo Domingo
Standardization of DNA extraction protocols for the molecular biology laboratory of the Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE – Extensión Santo Domingo
Cristian Bedón
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Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE – Extensión Santo Domingo
María Paula Báez
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Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE – Extensión Santo Domingo
Jairo Cueva
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Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE – Extensión Santo Domingo
Resumen
El estudio sobre la molécula de ADN vegetal en las universidades no se encuentra muy tecnificado siendo unos de los procesos más importantes de la biología molecular, esto debido a varios factores, ya que en este proceso intervienen varios agentes químicos algunos de los cuales son benéficos y otros presentan grandes desventajas como mayor contaminación de impurezas en las muestras, altos niveles de toxicidad, costos elevados, entre otros aspectos; afectando directamente en la obtención de una molécula de alta calidad y pureza lo que presenta inconvenientes para posterior manejo, en consecuencia el motivo del proyecto surgió porque el laboratorio de biología molecular de la Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE – extensión Santo Domingo no cuenta con un protocolo estandarizado de extracción de ADN vegetal, de manera que fue necesario una investigación, posterior aplicación y estandarización de un protocolo, que además se aprovecharía para un mejor conocimiento sobre el tema, puesto que es importante dentro de dicha materia. El objetivo del trabajo fue evaluar y estandarizar el mejor protocolo para la extracción de ADN en tejidos vegetales, mediante una comparación basada en tres protocolos de extracción de ADN en tejido vegetal tomados de artículos científicos y libros, que fueron modificados en concentraciones y sustancias químicas como Tritón X-100 y diferentes concentraciones de CTAB de extracción al igual que varios factores como temperatura y tiempos durante el proceso, para ello las muestras tomadas fueron de tomate (Solanum lycopersicum) y arazá (Eugenia stipitata) , realizando tres repeticiones por cada muestra. Como resultados se obtuvieron que las concentraciones de ADN extraído fluctuaron en un rango de 359.6 a 1361 ng/μl y A260/ A280 con una relación de 1.79 a 1.95 lo que permitió determinar que el producto extraído contaba con una gran cantidad de nucleótidos y su contaminación ya sea por proteína o contaminantes químicos propios del proceso de extracción oscilaba en un rango aceptable para el empleo de este tipo de protocolos. Por esta razón los protocolos aplicados en esta investigación fueron óptimos para biología molecular ya que la pureza y cantidad del ADN obtenido presentan porcentajes significativos de importancia por lo que pueden ser empleados para investigaciones posteriores referentes al tema tratado.
Palabras Clave: ADN vegetal, protocolos, estandarización, bilogía molecular, pureza.
Abstract
The study on the plant DNA molecule in universities is not very technified being one of the most important processes of molecular biology, this due to several factors, since this process involves several chemical agents some of which are beneficial and others have major disadvantages such as increased contamination of impurities in samples, high levels of toxicity, high costs, among other aspects; The reason for the project arose because the molecular biology laboratory of the University of the Armed Forces ESPE - Santo Domingo extension does not have a standardized protocol for plant DNA extraction, so it was necessary a research, subsequent application and standardization of a protocol, which would also be used for better knowledge on the subject, since it is important within the subject. The objective of the work was to evaluate and standardize the best protocol for DNA extraction in plant tissues, through a comparison based on three protocols for DNA extraction in plant tissue taken from scientific articles and books, which were modified in concentrations and chemical substances such as Triton X-100 and different concentrations of CTAB extraction as well as several factors such as temperature and time during the process, for this the samples taken were tomato (Solanum lycopersicum) and araza (Eugenia stipitata), making three repetitions for each sample. As results were obtained that the concentrations of extracted DNA fluctuated in a range of 359.6 to 1361 ng/μl and A260/A280 with a ratio of 1.79 to 1.95 which allowed to determine that the extracted product had a large amount of nucleotides and its contamination either by protein or chemical contaminants of the extraction process oscillated in an acceptable range for the use of this type of protocols. For this reason the protocols applied in this research were optimal for molecular biology since the purity and amount of DNA obtained present significant percentages of importance so they can be used for further research on the subject treated.
Key Words: Plant DNA, protocols, standardization, molecular bilogy, purity.
