Biotipificación y Genotipificación de Brucella spp., aislada en diferentes reservorios en el Ecuador
Biotyping and genotyping of Brucella spp. isolated in different reservoirs in Ecuador
Elizabeth Minda-Aluisa
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Universidad Central del Ecuador. Instituto de Investigación en Salud Pública y Zoonosis (CIZ-UCE)
Maritza Celi-Erazo
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Universidad Central del Ecuador. Instituto de Investigación en Salud Pública y Zoonosis (CIZ-UCE)
Washington Benítez-Ortíz
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Universidad Central del Ecuador. Facultad Medicina Veterinaria y Zootecnia. Instituto de Investigación en Salud Pública y Zoonosis (CIZ-UCE)
L. Olmedo-Pinchao
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Universidad Central del Ecuador. Instituto de Investigación en Salud Pública y Zoonosis (CIZ-UCE)
R. Rodríguez-Hidalgo
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Universidad Central del Ecuador. Facultad Medicina Veterinaria y Zootecnia. Instituto de Investigación en Salud Pública y Zoonosis (CIZ-UCE)
J. Ron-Román
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Universidad de las Fuerzas Armadas - ESPE. Carrera de Ingeniería Agropecuaria IASA
RESUMEN
La brucelosis es una enfermedad infecto-contagiosa causada por bacterias del género Brucella., considerada como la zoonosis bacteriana más importante a nivel mundial. Brucella spp., es un cocobacilo Gram-negativo, intracelular facultativo, no encapsulado, no formador de esporas; que afecta a un rango muy diverso de mamíferos incluidos el hombre, bovinos, porcinos, caprinos, ovinos, caninos y en vida silvestre a roedores, zorros y mamíferos marinos (cetáceos y pinnípedos). Esta diversidad de animales hospederos de la bacteria, complica en gran medida las acciones de lucha contra esta infección. En el Ecuador no se conocen las especies y biotipos circulantes de Brucella spp. Debido a que el género no solo dispone de especies sino también de biovariedades, la FAO y OMS recomiendan que siempre que sea posible, la tipificación debe llevarse hasta la categoría de biotipo, pues a menudo tienen una distribución geográfica particular y pueden proporcionar información epidemiológica importante. Por ello, se tomaron muestras de humanos (sangre), bovinos (leche, órganos y sangre), caprinos (sangre y leche) y caninos (sangre y órganos) con la finalidad de tipificar a nivel microbiológico (biotipificación) y molecular (genotipificación). Inicialmente las poblaciones fueron evaluadas por métodos serológicos, Rosa de Bengala (RB) y Sero-aglutinación lenta en tubo (SAT-EDTA), para determinar la prevalencia de la enfermedad y seleccionar las muestras para aislamiento. Los cultivos se realizaron utilizando medio selectivo Farrel y se biotipificó con pruebas bioquímicas como catalasa, oxidasa, ureasa, producción de ácido sulfídrico, medios coloreados y sueros monoespecíficos. Paralelamente, se realizó una genotipificación amplificando el gen IS711 y secuencias repetitivas (VNTR’s); con las técnicas IS711 PCR para determinar género bacteriano y AMOS PCR conjuntamente con ‘HOOF-Print’ para determinar especie y biovariedad. Los resultados mostraron que las cepas circulantes en el Ecuador son Brucella abortus bv. 1 y 4, presentes en bovinos, humanos y caninos, demostrando el problema de Salud Pública que representan los bovinos al ser un foco de infección. Finalmente, no se encontró la patología en caprinos, no obstante, la detección de una cepa vacunal (S19) en muestra caprina pone en alerta el manejo inapropiado de la vacuna.
PALABRAS CLAVES
Brucelosis, zoonosis, RB, microbiología, PCR, Brucella abortus
ABSTRACT
Brucellosis is an infectious-contagious disease caused by bacteria of the genus Brucella, considered the most important bacterial zoonosis in the world. Brucella spp., Is a Gram-negative, facultative intracellular, non-encapsulated, non-spore-forming cocobacillus; which affects a very diverse range of mammals including humans, cattle, pigs, goats, sheep, canines and in wildlife to rodents, foxes and marine mammals (cetaceans and pinnipeds). This diversity of host animals of the bacteria, greatly complicates the actions to fight against this infection. In Ecuador, the circulating species and biotypes of Brucella spp. Because the genus not only has species but also biovaries, FAO and WHO recommend that wherever possible, typing should be carried to the category of biotype, as they often have a particular geographical distribution and can provide important epidemiological information. Therefore, samples of humans (blood), cattle (milk, organs and blood), goats (blood and milk) and dogs (blood and organs) were taken with the purpose of typing at the microbiological (biotyping) and molecular (genotyping) level. Initially the populations were evaluated by serological methods, Rose Bengal (RB) and slow sero-agglutination in tube (SAT-EDTA), to determine the prevalence of the disease and select the samples for isolation. The cultures were performed using Farrel selective medium and biotyped with biochemical tests such as catalase, oxidase, urease, production of sulfuric acid, colored media and monospecific sera. In parallel, genotyping was performed by amplifying the IS711 gene and repetitive sequences (VNTR's); with IS711 PCR techniques to determine bacterial genus and AMOS PCR with 'HOOF-Print' to determine species and biovar. The results showed that the circulating strains in Ecuador are Brucella abortus bv. 1 and 4, present in bovines, humans and dogs, demonstrating the Public Health problem that cattle represent as a source of infection. Finally, the pathology was not found in goats, however, the detection of a vaccine strain (S19) in the goat sample puts on alert the inappropriate management of the vaccine.
KEYWORDS
Brucellosis, zoonosis, RB, microbiology, PCR, Brucella abortus
