Aislamiento, identificación y caracterización molecular de Lactobacillus spp. del tracto digestivo de tilapias (Oreochromis spp) en Santo Domingo.
Lactobacillu spp isolation, identification and molecular characterization from the digestive tract of tilapia (Oreochromis spp) from Santo Domingo.
Stephany Mena
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Universidad de las Fueras Armadas ESPE
Armando Reyna-Bello
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Departamento de Ciencias de la Vida y la Agricultura, Carrera de Ingeniería en Biotecnología. Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE, Santo Domingo, Ecuador
Resumen
En el tracto digestivo de los peces se encuentra una amplia flora bacteriana compuesta principalmente por E. coli y Lactobacillus spp, estos últimos son conocidos como probióticos que promueven un ambiente inhóspito para los patógenos, no obstante su variabilidad genética ha sido poco evaluada. Es por esto, nos trazamos como objetivo la determinación de la variabilidad genética entre E. coli y tres aislados de Lactobacillus spp obtenidos a partir de tilapias criadas en la sección de acuicultura de la Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE-Santo Domingo. Para esto, primeramente se realizó la captura de tres individuos, los cuales fueron sacrificados y sembrado su contenido gástrico en medio MRS Agar (Man, Rogosa y Sharpe). Una vez identificadas las colonias por ser de forma redonda, blanquecinas, Gram positivas, catalasa negativa y morfológicamente bacilos no esporulados, estas fueron sembradas en medio MRS líquido por 24 h y recolectadas por centrifugación. Posteriormente se extrajo su ADN genómico por saltin out, este fue digerido con las enzimas EcoRi I, Hind III y MSC I y se evidenció en un gel de electroforesis al 1%. Con la finalidad de utilizar un control positivo se realizó un proceso similar con E. coli (cepa DH5α). Al realizar la comparación entre los aislados se pudo observar diferencias genómicas entre E. coli y Lactobacillus spp, lo que demuestra la vigencia de esta técnica para evaluar variabilidad genómica.
Palabras Claves: Lactobacillus, Oreochromis sp, identificación molecular, enzimas de restricción, genoma
Summary
There are a broad bacterial flora in digestive tract of fish composed mainly by E. coli and Lactobacillus spp., the last are known as probiotics that promote an inhospitable environment for pathogens, however their genetic variability has been poorly evaluated. In order to determining the genetic variability between E. coli and three isolates of Lactobacillus spp. obtained from tilapia raised in the aquaculture section of the Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE-Santo Domingo, the capture of three individuals and the sowing its gastric content in medium MRS Agar (Man, Rogosa and Sharpe) was done. Once the colonies were identified as rounded, whitish, Gram positive, negative catalase and morphologically non-sporulated bacilli, they were seeded in liquid MRS medium for 24 h and collected by centrifugation. Subsequently, their genomic DNA was extracted by saltin out, and digested with EcoRi I, Hind III and MSC I enzymes and evidenced in a of 1% electrophoresis gel. In order to use a positive control, a similar process was carried out with E. coli (strain DH5α). When comparing the isolates, genomic differences could be observed between E. coli and Lactobacillus spp, demonstrating the validity of this technique to evaluate genomic variability.
Key words: Lactobacillus, Oreochromis sp, molecular identification, restriction enzymes.
